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【摘要】 目的 建立香舒饮分散片的质量标准。方法 采用薄层色谱法对处方中佛手、冰片进行鉴别；采用高效液相色谱法测定制剂中柚皮苷的含量,色谱柱为AichromBond-AQ-C18 (4.6 mm×150 mm,5 μm),以水相为流动相A,乙腈为流动相B,其中水相由水-醋酸(100∶1)组成,按流动相A(%)∶流动相B(%)＝84%∶16%进行洗脱,检测波长为283 nm,柱温30 ℃,流速1 mL/min。结果 薄层色谱专属性强；柚皮苷的线性范围为0.120 6～0.603 μg,r=0.999 9,平均加样回收率为97.90%,RSD=1.76%(n=5)。结论 该方法简便、准确、重现性好,可作为香舒饮分散片的质量控制标准。
【关键词】 香舒饮分散片；柚皮苷；佛手；冰片；质量标准
Abstract：Objective To establish the quality standard for Xiangshuyin Dispersible tablets. Methods Fructus citrus sarcodactylis and Borneolum syntheticum in the prescription were identified by TLC. The content of the total Naringin was determined by HPLC. The column of AichromBond-AQ-C18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm) was used. The mobile phase was mobile phase A-mobile phase B (84∶16), mobile phase A was Water-Acetic Acid (100∶1), mobile phase B was Acetonitrile, at the flow rate of 1.0 mL/min, the column temperature of 30 ℃, and peaks were detected at 283 nm. Results The study on the quality control showed that the characteristic of identification by TLC was distinct and highly specific. The linear range of Naringin was 0.120 6～0.603 μg, r=0.999 9, the average recovery was 97.90%, RSD=1.76% (n=5). Conclusion The method was easy to operate with accurate result and good reproducibility. It can be used effectively for the quality control of the preparation.
Key words：Xiangshuyin Dispersible tablets；Naringin；Fructus citrus sarcodactylis；Borneolum syntheticum；quality standard
香舒饮分散片由佛手、香橼、枳壳、陈皮、香附、冰片、鸡内金等组成,具有理气消胀、和胃止痛的功效,适用于慢性胃炎、消化性溃疡。笔者按照中药新药研究规范,根据以上药材的理化性质[1],对佛手、冰片进行了薄层鉴别,同时采用HPLC法测定了制剂中柚皮苷的含量,建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。
1 仪器与材料
Waters-515高效液相色谱仪、2487紫外检测器、Empower色谱工作站。实验药材购于江苏省药材公司,南京中医药大学王春根教授进行品种和质量鉴定；柚皮苷对照品(批号722-200107)及佛手、香橼对照药材均购自中国药品生物制品检定所。三批香舒饮分散片中试产品批号分别为050610、050613、050622,由江苏神华药业提供。所有试剂均为色谱纯或分析纯。
2 定性鉴别
2.1 佛手的薄层色谱鉴别[2]
取佛手对照药材1 g,加无水乙醇10 mL,超声处理20 min,滤过,滤液浓缩至干,加无水乙醇1 mL使溶解,作为对照品溶液。取本品研细,称取约1 g,加无水乙醇10 mL,超声处理20 min,滤过,滤液浓缩至约1 mL,作为供试品溶液。按处方除去佛手制成阴性样品,按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
吸取上述3种溶液各2 μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-醋酸乙酯(3∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,而阴性对照液无此斑点。
2.2 冰片的薄层色谱鉴别
取冰片对照药材,加乙酸乙酯制成1 mg/mL的溶液,作为对照品溶液。取本品5 g,研细混匀,称取约2 g,加乙醚10 mL,超声处理10 min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙酸乙酯溶解至约1 mL,作为供试品溶液。按处方除去冰片制成麻黄阴性样品,按供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。
分别吸取上述各溶液5 μL,分别点于同一块硅胶G薄层板上,以石油醚-乙酸乙酯-氯仿(11∶1∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛浓硫酸溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的紫红色斑点,而阴性对照液在该位置无此斑点。
3 含量测定
本处方中枳壳、陈皮、香橼、佛手同为芸香科植物,都含有黄酮类成分柚皮苷,故在含量测定时选择制剂中的柚皮苷为指标[3]。
3.1 色谱条件
AichromBond-AQ-C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以水相为流动相A,乙腈为流动相B,其中水相由水-醋酸(100∶1)组成,按流动相A(%)∶流动相B(%)=84%∶16%进行洗脱,检测波长为283 nm,柱温30 ℃,流速1 mL/min。
3.2 对照品溶液的制备
精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的柚皮苷对照品,加甲醇制成每1 mL含0.402 mg的溶液,摇匀,作为母液。精密量取对照品溶液1 mL,置10 mL容量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成0.040 2 mg/mL柚皮苷对照品溶液,备用。
3.3 供试品溶液的制备
取3个批号的香舒饮分散片,每批取2片,共2份,精密称定重量,置100 mL锥形瓶中,加甲醇50 mL,密塞,称定重量,超声1 h,放冷,密塞,称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密吸取续滤液2.5 mL,分别置10 mL量瓶中,加甲醇定容至刻度,摇匀,备用。
3.4 系统适应性考察
分别吸取柚皮苷对照液和各供试品溶液10 μL,注入液相色谱仪,理论板数以柚皮苷峰计不低于4 000,此时,柚皮苷峰与其它组分峰基线分离,分离度R>1.5,保留时间约为10.5 min。结果见图1。
3.5 线性关系考察
精密吸取浓度为0.040 2 mg/mL柚皮苷的对照品溶液1.5、3.0、4.5、6.0、7.5 mL定容到10 mL容量瓶中,各进样20 μL,各进2针,以柚皮苷平均峰面积Y为纵坐标,进样量X(μg)为横坐标进行线性回归,得回归方程：Y=1.06×106X+22 183,r= 0.999 9,线性范围为0.120 6～0.603 μg。
3.6 精密度试验
精密吸取浓度为0.040 2 μg/μL对照品溶液10 μL,连续进样5次,结果柚皮苷峰面积值的RSD=0.99%。
3.7 稳定性试验
精密吸取批号为050610的供试品溶液10 μL,每间隔2 h进一针,连续考察10 h,结果柚皮苷峰面积值的RSD=0.61%,表明在10 h内基本稳定。
3.8 重复性试验
取同一批号(050610)的样品,共5份,按样品测定项下的方法测定,测得样品中指标成分柚皮苷的含量,RSD=1.95%,结果表明重复性良好。
3.9 加样回收率试验
取批号为050613的分散片研细,精密称定5份,分别置100 mL烧瓶中,各精密加入浓度为0.94 mg/mL的柚皮苷对照液5 mL,用与3.3项下相同方法制得试液。精密吸取2.5 mL续滤液,定容于10 mL容量瓶中,作为供试溶液。吸取供试液10 μL注入液相色谱仪中。结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
3.10 样品测定
取3个批号的香舒饮分散片适量,分别按供试品溶液的制备方法,制成供试品溶液。按上述色谱条件,分别吸取10 μL注入液相色谱仪,采用随行标准,外标二点法定量。结果见表2。表2 柚皮苷含量测定结果（略）
由实验结果可知,仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好,符合定量要求。根据测定结果,暂定每片香舒饮分散片中含柚皮苷(C27H32O14·2H2O)不得少于3.38 mg(取10个批号平均值的80%为其下限)。
4 讨论
本处方由多味药材组成,因鸡内金为动物药,无特征性成分,且价格低廉,在处方中地位又较次,故未建立鸡内金的定性鉴别方法。在陈皮、枳壳的鉴别中,由于与处方中佛手、香橼同属芸香科植物,阴性有干扰,故正式标准中未将其纳入。
本方中枳壳、陈皮、香橼、佛手同为芸香科植物,是方中的重要药物,且都含有黄酮类成分柚皮苷,故在含量测定时,选择制剂中的柚皮苷为指标,既有较强的科学性和代表性,又有实际工作中的可操作性与经济性。
【参考文献】
[1] 肖崇厚,杨松松,洪筱坤.中药化学[M].上海：上海科学技术出版社,1997.265－276.
[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2005.124.
[3] 梁生旺.中药制剂分析[M].北京：中国中医药出版社,2003.126－127.
