相关热词搜索：
摘要：目的：建立罗通定原料中右旋四氢巴马汀的测定方法，考察市售原料的质量。方法：采用高效液相色谱法测定罗通定原料中的右旋四氢巴马汀杂质，以无水乙醇：甲醇（95:5）为流动相，色谱柱为Kcromasil Cellucoat （4.6mm×250mm，5μm），检测波长：230 nm，流速：0.5ml/min，进样量：20 μl，柱温：30 °C。结果：罗通定原料中右旋四氢巴马汀在该色谱条件下峰理论板数大于5000，供试品溶液图谱中右旋四氢巴马汀主峰与主峰分离度大于2.0。空白溶剂、样品溶液中其他杂质峰对右旋四氢巴马汀的检测均无干扰，该方法能有效检出原料中右旋四氢巴马汀。结论：此测定方法测定原料中右旋四氢巴马汀杂质的专属性强、准确、灵敏、耐用性好。
关键词：高效液相色谱法；右旋四氢巴马汀。
中图分类号：R927.2文献标识码：A文章编号：1671-5837(2018)06-0088-02
罗通定又名左旋延胡索乙素，其主要药理作用：对中枢神经系统的作用包括镇痛、镇静和催眠作用，抗行为敏感化作用；对心脑血管系统的作用包括对脑缺血再灌注损伤的保护作用、另外保护心肌细胞结构和功能的完整性，从而延缓或减轻对心肌缺血再灌注损伤的影响。具有养心安神之功效，主要用于心神不安，失眠，多梦，惊悸等[1]。罗通定在提取中使用酸碱提取后，再用乙醇手性拆分等精制过程，最后得到左旋延胡索乙素（罗通定），由于罗通定分子结构中具有手性碳，手性拆分不完全可能会带入右旋四氢巴马汀，右旋四氢巴马汀活性低，含量过高会影响罗通定的药效，因此需加以控制。为了考察罗通定中右旋四氢巴马汀的水平，提高产品质量，保证用药安全，作者建立了原料中右旋四氢巴马汀的检测方法，并考察市售罗通定的右旋四氢巴马汀杂质水平，指导生产质量控制。
1 仪器与试药
LC2030A高效液相色谱仪（岛津公司）；电子天平AX205（梅特勒－托利）。罗通定（重庆希尔安药业有限公司，批号：160801、160802、160803，四川协力制药：批号：150401）；罗通定对照品（中国食品药品检定研究院，批号：100452-200301），延胡索乙素对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110726-201515），甲醇（色谱级）。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及溶液配制
色谱条件：以无水乙醇：甲醇（95:5）为流动相，色谱柱为Kcromasil Cellucoat （4.6mm×250mm，
5μm），检测波长：230 nm，流速：0.5ml/min，进样量：20 μl，柱温：30 °C 。
系统适用性溶液：取罗通定和延胡索乙素对照品适量，加入乙醇稀释成罗通定0.3mg/ml和延胡索乙素0.45μg/ml的混合溶液，摇匀。
供试品溶液：取罗通定约15mg，精密称定，置50ml量瓶中，加乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。
对照溶液：量取供试品溶液3ml于100ml量瓶中，加入乙醇稀释至刻度，摇匀，量取上述溶液1ml于20ml量瓶中，加入乙醇稀释至刻度，摇匀。
系统适用性：照高效液相色谱法（中国药典2015年版通则0512）测定，精密量取空白溶液、系统适用性溶液、自身对照溶液各20μl，注入液相色谱仪，调节检测定量限与检测限，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10%~20%显示；再精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录罗通定，右旋四氢巴马汀峰面积。理论塔板数按罗通定计算不低于2500 ，并要求罗通定与右旋四氢巴马汀的分离度不低于2.0。
2.2 专属性试验
专属性：精密量取无水乙醇、供试溶液和系统适应性溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：空白溶液出峰在8分钟前，罗通定和右旋四氢巴马汀的保留时间均在9.5分钟以后，空白峰可进行扣除，不干扰右旋四氢巴马汀峰的检测。
2.3线性与范围
分别取罗通定对照品和右旋四氢巴马汀对照品适量，精密称定，加流动相分别溶解稀释成浓度为0.0000297~0.00148mg/ml和0.0000291~0.194mg/ml的对照品溶液，取各对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果罗通定线性回归方程为A = 120385C + 1.926（r=0.9996），延胡索乙素的线性回归方程为A=113344C+2.373（r=1.0）。
2.4 定量限及检测限
取罗通定对照品、延胡索乙素对照品适量，精密称定，分别加流动相溶解并逐步稀释成系列浓度溶液，取各溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按信噪比3:1计算最低检测限（LOD），按信噪比10:1计算定量限（LOQ），结果罗通定和延胡索乙素的定量限分别为0.59ng和0.58ng；检测限分别为0.18ng和0.17ng。
2.5 准确度
称取延胡索乙素对照品加入乙醇溶解并稀释成浓度约为30μg/ml的右旋四氢巴马汀对照品贮备液a，量取贮备液a 5ml于20ml的量瓶中，加入乙醇稀释成浓度约为7.5μg/ml的右旋四氢巴马汀对照品贮备液b，量取贮备液a1ml于20ml的量瓶中，加入乙醇稀释成浓度约为1.5μg/ml的右旋四氢巴马汀对照品贮备液c。称取9份罗通定约15mg，置50ml量瓶中，分别加入上述右旋四氢巴马汀对照品贮备液c 1ml、右旋四氢巴马汀对照品贮备液b 3ml、3.6ml、（经配制后为右旋四氢巴马汀杂质对照品溶液浓度的定量限浓度、100%、120%，各3份），加入流动相稀释至刻度，即得供试品溶液。分别精密量取上述供试品溶液和右旋四氢巴马汀对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算供试液中右旋四氢巴马汀的含量，考察本品右旋四氢巴马汀的回收率。结果右旋四氢巴马汀回收率在97.61%-102.13%范围内，RSD为1.30%，表明准确度良好。
2.6 精密度试验
取同一供试品溶液连续进样5次，以峰面积考察其进样精密度，RSD=0.30％，说明进样精密度良好。
2.7 重复性和中间精密度
制备6份供试品溶液（批号：160801）及其对应的对照溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，结果均未检出。由不同分析人员在不同日期取罗通定（批号：160801）制备6份供试品溶液及其对应的对照溶液，进行测定，结果也未检出。表明本方法测定有关物质的重复性及中间精密度较好。
2.8 溶液稳定性
取供试品溶液在0、2、4、6、8h分别测定峰面积，检查其室温放置稳定性，结果RSD=0.73％。表明供试品溶液室温放置8h稳定。
2.9 耐用性试验
微调柱温、流速，流动相和色谱柱，罗通定与右旋四氢巴马汀均能良好的分离，右旋四氢巴马汀的相对保留时间在0.73~0.76之间，耐用性较好。
2.10右旋四氢巴马汀测定结果
重庆希尔安药业有限公司三批样品（批号：160801、160802、160803）及四川协力制药1批样品（批号：150401）；照上述右旋四氢巴马汀方法进行检测，结果上述4批样品均未检出右旋四氢巴马汀，研究结果表明目前在产罗通定生产企业的质量优良，均未检出有害杂质右旋四氢巴马汀。
3 讨论
控制罗通定原料中右旋四氢巴马汀的含量，提高药物的质量，从而保障药物临床应用安全性。本文探索性研究了罗通定中右旋四氢巴马汀杂质的测定方法，该方法专属性强，灵敏度高，能准确检出本品右旋四氢巴马汀杂质量，另外从检出结果看成品中右旋四氢巴马汀杂质量极小，均为检查，说明市场产品过硬。
参考文献
[1]杜远东等.罗通定的药理作用和临床应用研究进展[J].西北药学杂志：2012（1）:91-94.
作者简介：霍仁霞，工程师，执业药师；研究方向：药学研究及药品采购。
