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清开灵胶囊由金银花、板蓝根、栀子、水牛角、胆酸等组成,具有清热解毒功效,主治上呼吸道感染、病毒性感染、高热等症。栀子苷为栀子的主要有效成分之一,清开灵胶囊的质量标准目前未收载栀子苷含量测定方法,为了更好控制药品质量,我们采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中的栀子苷含量,实验结果表明,该方法分离度高、重复性好,获得了满意的结果。
1 仪器与试药
Agilent 1100型HPLC仪,Rev.B.02.01 SR1色谱工作站,
Gracesmart C18色谱柱(250 mm×4.0 mm,5 μm)；超声波处理仪MUS/1006。栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所提供,批号110749-200613)；清开灵胶囊样品(广州白云山明兴制药有限公司,批号Mk2901、Mk2902、Mk2903)。乙腈、甲醇为色谱纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Gracesmart C18(250 mm×4.0 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(15∶85),检测波长为238 nm,流速为1.0 mL/min,进样量10 μL[1]。
2.2 供试溶液的制备 教学论文发表
2.2.1 对照品溶液的制备
精密称取栀子苷对照品15.1 mg,置50 mL棕色量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密量取5 mL,置100 mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每1 mL含15.1 μg的溶液,即得。
2.2.2 供试品溶液的制备
取本品10粒,除去胶囊壳,内容物精密称定,研细,取粉末0.25 g,精密称定,置25 mL量瓶中,加甲醇20 mL,超声处理(功率300 W,频率33 kHz)30 min,放冷,加甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45 μm)滤过,即得。
2.2.3 阴性样品溶液的制备
按处方组成,取除栀子外的其余药味,按工艺要求制成不含栀子苷的清开灵胶囊,再按供试品溶液的制备方法操作,得阴性样品溶液。
2.3 空白试验
按上述仪器和实验条件,取Mk2901批供试品溶液、阴性样品溶液、栀子苷对照品溶液分别注入液相色谱仪,测定。结果供试品色谱图中,呈现与对照品保留时间相同的色谱峰,且基线平稳,分离度好,阴性样品在此保留时间无色谱峰(见图1)。
2.4 线性关系
分别精密吸取浓度为0.302 mg/mL对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL至10 mL容量瓶中,用甲醇稀释至刻度,分别吸取10 μL注入液相色谱仪,测得峰面积。以峰面积为纵坐标,栀子苷对照品进样量(μg)为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程：Y＝1 351.973X－4.454,r＝0.999 8,在0.060 4～0.302 0 μg范围内,对照品进样量与峰面积呈良好的线性关系。 教学论文发表
2.5 精密度试验
取Mk2901批供试品溶液,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积,计算其RSD＝0.83%。结果表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取Mk2901批供试品溶液,按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、12 h测定峰面积,计算其RSD＝0.86%。结果表明样品在10 h内稳定。
2.7 重复性试验
取本品内容物(批号Mk2901)10 g,混合均匀,精密称取样品5份,每份0.25 g。按供试品溶液制备方法制备,依上述测定条件测定,并计算含量,结果平均含量为1.602 4 mg/g,RSD＝1.22%。表明本法重复性好。
2.8 加样回收率试验
精密量取重复性试验项下的样品0.1 g各5份,分别精密加入浓度为302 μg/mL的栀子苷对照品溶液0.5 mL,按供试品溶液制备方法处理得供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率,结果表明此色谱条件测定栀子苷含量回收率良好。见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.9 样品测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μL,分别注入液相色谱仪,依上法测定,即得。依上述色谱条件测定Mk2901、Mk2902、Mk2903批清开灵胶囊中栀子苷含量,结果见表2。表2 栀子苷含量测定结果(略) 教学论文发表
3 讨论
栀子苷为环烯醚萜苷类,易溶解于甲醇等溶剂,溶解时采用超声处理,有利于促进样品中的栀子苷溶解。栀子苷在238 nm波长处有最大吸收,故选定238 nm作为检测波长。流动相比较了乙腈-水(15∶85)和乙腈-水(10∶90)系统,栀子苷主峰均可与杂质峰分离,为缩短检测时间,故选择乙腈-水(15∶85)为流动相。
本试验建立的清开灵胶囊中栀子苷含量HPLC测定方法,灵敏度、稳定性及重复性能够符合含量测定的要求,而且操作简便,可以作为清开灵胶囊生产中栀子苷含量的测定方法。
【参考文献】
[1] 李小敏.高效液相色谱法测定复方清肝胶囊中栀子苷含量[J].中国药业,2008,17(10)：43－44.
