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摘 要：观察红花水提物对血管内皮细胞的保护作用，探求其抗氧化的机制。方法：利用大鼠原代心肌微血管内皮细胞（rCMEC）的培养进行试验，并对获得的数据进行方差分析（ANOVA）及多组间比较等。结果：提示呈现红花水提物具有提高抗氧化酶活性、减少氧化产物生成及减轻ox-LDL损伤作用的趋势。结论：通过红花水提物预处理，可以减轻ox-LDL对内皮细胞的氧化损伤。
关键词：红花水提物；心肌微血管内皮细胞；氧化低密度脂蛋白
中药在治疗心血管疾病方面具有明显的功效，本文就红花水提物对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）所致的心肌微血管内皮细胞损伤的影响机制做一探讨。
1 资料与方法
1.1 实验药物
1.1.1 红花水提物过程：取新疆红花200 g，加水2 500 mL，加热到沸腾，然后提取1.0 h，并进行过滤，最后把滤液浓缩到每毫升相当于3.338 g生药[1]。
1.2 实验动物：出生5～7d的Wistar大鼠乳鼠。
1.3 实验试剂：噻唑蓝（MTT，sigma，SP 1 080）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）、超氧化物歧化酶（SOD）、二甲基亚砜（DMSO）、丙二醛（MDA）、一氧化氮合酶（NOS）、乳酸脱氢酶（LDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、一氧化氮（NO）和黄嘌呤氧化酶（XOD）测定试剂盒。
1.4 实验仪器：超净工作台，MCO-15 AC型CO2培养箱，MK型倒置显微镜，H2S-H型恒温水浴振荡器，LDZ 4-0.8型离心机，550型酶联免疫检测仪。
1.5 红花水提物对ox-LDL所致心肌微血管内皮细胞损伤的影响的实验方法
1.5.1 培养大鼠原代心肌微血管内皮细胞（rCMEC）：首先进行rCMEC原代培养，经鉴定为rCMEC后，再传代培养，把第3代rCMEC用于实验[2]。
1.5.2 实验分组：以1.5×105个/mL的密度把内皮细胞接种于96孔板，每孔0.1 mL，24 h细胞贴壁后，分组：①空白对照组：每孔加入无血清培养基100 μL；②模型对照组：每孔加入剂量为100 μg·mL-1的ox-LDL的无血清培养基100 μL作用24 h；③红花水提物500 μg·mL-1组，100 μg·mL-1，20 μg·mL-1组；造模前24 h分别加入不同浓度的红花水提物100 μL，然后加入含ox-LDL的无血清培养基100 μL作用24 h[3]。
1.6 形态学观察
1.7 指标检测及计算：通过MTT法检测，测出活细胞的量与吸光度（A值）成正比，故用A值表示细胞存活率，抑制率=[1-（实验孔A值-空白孔A值）/（对照孔A值-空白孔A值）]×100%。在酶联免疫检测仪上进行MTT的检测[4]。
1.8 数据分析：以均值±标准差形式来表示结果，采用方差分析（ANOVA）进行多组间比较，以P﹤0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 形态学观察：在倒置显微镜下观察发现：正常对照组与大、中剂量组细胞呈现相似形态，无显著性变化；模型组细胞出现皱缩，呈现空泡。模型组大部分细胞在MTT染色后不着色，少数细胞出现紫色结晶物，其数量随着各个给药组红花水提物浓度的增加而增多。
2.2 对内皮细胞存活率的影响：红花水提物500 μg?mL-1，100 μg?mL-1，20 μg?mL-1均能明显抑制ox-LDL引起的内皮细胞损伤，使细胞存活率明显提高
2.3 不同浓度的红花水提物均具有很好的抑制作用，对ox-LDL所致的微血管内皮细胞的NO，SOD，GSH-Px和 NOS含量降低，还可以减少细胞上清液中LDH，XOD和MDA的含量。
3 讨论
实验发现，生物体内低密度的氧化修饰呈现一个自由基的链式反应过程。利用红花水提物来提高受ox-LDL损伤后内皮细胞的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶的活性，以减轻氧化损伤。通过红花水提物的预处理能有效减轻ox-LDL对内皮细胞的氧化损伤，抑制丙二醛（MDA）和乳酸脱氢酶（LDH）的生成，提高NO，SOD，GSH-Px和NOS的活性，保护内皮细胞，抑制其氧化损伤。
参考文献：
[1] 陈少刚,李长潮.当归注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用[J].中国中西医结合杂志,1995,10(1):142.
[2] 何煜舟,丁美萍.大豆异黄酮对氧化损伤的血管内皮细胞的保护作用[J].浙江中医杂志,2006,13(2):334.
[3] 田晓华,丛建波,施定基,等.褐藻硫酸多糖清除活性氧自由基作用及动力学的ESR研究[J].营养学报,1997,23(4):274.
[4] 伍 静,姚尚龙,杨 艳,等. 异丙酚对鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤中的保护作用[J].中华麻醉学杂志,2002,17(9):312.
