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丹参系唇形科鼠尾草属植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bge.)的干燥根及根茎,具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦的功效。乳腺康巴布剂由丹参、莪术、拳参、鸡血藤、瓜蒌、地龙组成,其中丹参为君药。丹参中的脂溶性成分具有天然抗氧化作用、抗动脉粥样硬化、降低心肌耗氧量及抗菌、抑菌、抗炎、抗肿瘤作用；丹参中的水溶性成分对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用,还具有抗血小板聚集和抗血栓形成的作用。本试验以丹参中丹参酮ⅡA和浸膏率为指标,采用正交设计对影响丹参提取工艺的主要因素进行了考察。 教师论文发表
1 仪器与试剂
Agilent 110型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)； UV/Vis-WC1型褶合光谱仪,上海玉田分析仪器公司)；旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)。丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所,批号110766-200417)；丹参、莪术、拳参、鸡血藤、瓜蒌、地龙药材均购自佳木斯药材公司,并经刘娟教授鉴定,所有药材均符合2005年版《中华人民共和国药典》(一部)各项相应的要求,为合格产品。甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂有限公司)；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 试验方案设计
根据文献[1-3]及单因素试验,选取影响95%乙醇-50%乙醇-水法提取效果的粉碎度(A),溶剂量(B,药材重量的倍数)和提取时间(C)为考察因素,以丹参酮ⅡA的含量及浸膏率为考察指标,确定因素水平。见表1。表1 提取条件考察因素及水平表（略）
2.2 药材提取工艺
按配方比例称取药材粗粉75 g,共18份,按L9(34)正交设计,先用一定量95%乙醇浸泡3 h,回流一段时间后,再用50%进行回流提取,最后用水煎煮一段时间,合并提取液,药液浓缩至100 mL,备用。每组试验重复2次。
2.3 含量测定教师论文发表
2.3.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil Cl8(150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相：甲醇-水(83∶17),流速：1.0 mL/min,检测波长：270 nm。色谱图见图1。
2.3.2 对照品溶液的制备
取丹参酮ⅡA对照品适量,精密称定,置棕色量瓶中,加95%乙醇制成每1 mL含41 μg的溶液,即得。
2.3.3 标准曲线绘制
分别精密吸取对照品溶液(41.00 μg/mL) 5、10、15、20、25 μL,进样测定,以对照品进样量对峰面积作图,计算,得回归方程：Y＝4 723.8X－263.97,r＝0.999 6,说明丹参酮ⅡA对照品在0.205～1.025 μg范围内有较好的线性关系。
2.3.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液15 μL,按“2.3.1”项下条件测定,连续测定5次峰面积,结果表明,精密度RSD＝1.71%,说明精密度较高。
2.3.5 加样回收率试验
吸取一定量已知含量的提取液,加入一定量丹参酮ⅡA对照品,制备成5份样品,按前述条件进行测定。平均加样回收率为100.8%,RSD＝1.01%。
2.3.6 样品测定
吸取正交试验药液各2 mL,加95%乙醇定容至10 mL,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10 μL,按“2.3.1”项下条件测定。结果见表2,方差分析见表3。表2 L9(34)正交试验结果（略） 表3 丹参酮ⅡA方差分析表（略）教师论文发表
2.4 浸膏率测定
精密吸取正交试验药液5 mL,至已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,105 ℃烘3 h,移至干燥器中,冷却30 min,迅速精密称定重量,以干燥品计算供试液中浸出物的含量,得出浸膏率。结果见表2,方差分析见表4。表4 浸膏率方差分析表（略）
根据直观分析结果,极差大小分析得知：A因素对丹参酮ⅡA提取效率和浸膏率影响比较大,B、C因素影响较小。
结果表明,粉碎度对丹参酮ⅡA提取效率和浸膏率影响差异有统计学意义(P＜0.05),溶剂量和提取时间对提取效率影响差异无统计学意义(P＞0.05)。F0.05(2,2)＝19.00,F0.01(2,2)＝99.00。综合分析,并从生产角度考虑[4],最佳提取工艺为A3B3C2,即药材粉碎成40目粉,每次加12倍量溶剂,每次提取1 h。
2.5 验证试验
为了考察所选的提取工艺是否稳定,按该工艺重复3次,即粉碎成40目粉,每次加12倍量溶剂,各次提取1 h。提取后样品处理方法同“2.3.6”,平行操作3份样品,测定其中丹参酮ⅡA及浸膏得率,结果见表5。表5 验证试验结果（略）
3 讨论
在试验中发现,随着回流时间延长,测得丹参酮ⅡA含量呈下降趋势,可能是丹参酮ⅡA乙醇溶液和水溶液和对光、热和温度不稳定造成的[5]。此外,过碱性或过酸性的提取体系,也会造成丹参酮ⅡA不稳定甚至降解或转化。所以,在提取丹参药材及其制剂时,如果以丹参酮ⅡA为有效成分尤其是作为指标控制成分,上述影响因素应加以注意。
笔者开发的剂型为巴布剂,因此,在药材提取过程中选取了浸膏率作为提取的标准,另外选择了君药丹参中的主要有效成分丹参酮ⅡA作为提取效果的指标。在建立分析方法时,主要以丹参酮ⅡA为研究对象开展相应的分析方法学研究。丹参提取物成分较为复杂,根据现有试验条件,采用高效液相色谱法对提取液中的丹参酮ⅡA进行含量测定方法学研究。教师论文发表
在此基础上,笔者又对提取液中水溶性成分原儿茶醛作了初步含量测定,结合验证试验可以看出,95%乙醇-50%乙醇-水法提取药材比较稳定,而且其中的脂溶性和水溶性成分均能达到较佳的提取效果。
